雌激素通过调控RCC2参与乳腺癌细胞凋亡(2)
2.蛋白免疫印迹法检测RCC2的蛋白表达包括以下步骤：①组织蛋白提取，称量乳腺组织50 mg，加入裂解液充分研磨，冰上裂解30 min，于4℃ 12 000转/分离心30 min。取上清，于95℃变性15 min，于-80℃保存备用。②细胞蛋白提取，转染72 h后收集细胞，操作步骤同上。③蛋白免疫印迹法，取50 μg蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳，将蛋白恒流转至PVDF膜上，RCC2单克隆抗体(1∶ 1 000)4℃过夜，二抗(1∶ 5 000)37℃孵育2 h。用ECL发光液在荧光成像仪检测蛋白表达情况。
3.小干扰RNA(siRNA)转染
将MCF-7铺于6孔板，待细胞贴壁后进行转染。实验分为Allstars siRNA组和RCC2 siRNA组，转染步骤根据HiPerFect Transfection Reagent说明书进行。
4.实时荧光定量PCR
转染48 h后收集细胞 ......
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