2.3 原代心肌细胞的分离和培养

    取“2.2”项下原代心肌细胞悬液，置于37 ℃、5%CO2培养箱中差速贴壁90 min后，吸取细胞悬液，以1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入含10%FBS的DMEM高糖培养基适量，轻轻吹打。经0.4%台盼蓝染色后，于倒置显微镜下观察(死细胞染色后呈蓝色)，计算活细胞比率，并以此为参考调整细胞浓度至4×105个/mL，接种于培养板中，加入Brdu适量(终浓度为0.1 mmol/L)以抑制心肌成纤维细胞增殖。按上述条件培养48 h后，弃去上清液，细胞用不含FBS的DMEM高糖培养基同步化培养24 h。

    2.4 原代心肌细胞的鉴定

    取“2.3”项下原代心肌细胞适量，弃去培养基，于4%多聚甲醛溶液中固定10～20 min，加入cTnⅠ抗体(1 ∶ 50)，于4 ℃孵育过夜，随后加入SABC-FITC双标记IgG抗体(1 ∶ 100)，于常温下避光孵育2 h；加入DAPI染料适量，避光染色5 min，以水溶性封片剂封孔，于倒置荧光显微镜下观察、拍照(DAPI染料可将所有细胞核染成蓝色 ......