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编号:13788969
姜黄素对H2O2致H9c2心肌细胞损伤的抗凋亡作用及对NF-κB信号通路的调节作用研究(3)
http://www.100md.com 2020年12月1日 《中国药房》 202023
     2.4 细胞凋亡率的检测

    采用TUNEL法检测。取对数期生长的H9c2细胞,按5×104个/孔接种于放有细胞爬片的6孔板中,按“2.2”项下方法分组、造模、给药,每组设3个复孔。培养24 h后,取出细胞爬片,用磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)清洗2次后,置于4%多聚甲醛溶液中于室温固定30 min;用PBS清洗2次,用含0.3%TritonX-100试剂的PBS室温孵育5 min;每孔加入TdT酶5 μL和荧光标记液配制检测液45 μL,于37 ℃避光孵育1 h,滴加DAPI荧光染料避光孵育5 min;用PBST溶液清洗5 min×4次以除去多余的染料,再以PBS清洗3次,经中性树脂封片。采用激光扫描共聚焦显微镜对树脂片进行成像分析,对TUNEL阳性细胞(即镜下细胞核呈绿色荧光的凋亡细胞)进行计数并计算细胞凋亡率。上述试验重复3次。

    2.5 细胞中SOD活性及MDA含量的检测

    取对数生长期的H9c2细胞 ......
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