半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏CYP450酶活性的影响(2)
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2.5色谱条件Agilent C18柱(4.6 mm×50 mm，2.7 mm)，流动相为乙腈(A)0.2%乙酸(B)，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，进样量4 μL。其中CYP2C6：乙腈(A)0.2%乙酸(B) 40∶60，检测波长229 nm。CYP2E1：乙腈(A)0.2%乙酸(B) 65∶35，检测波长287 nm。CYP3A1/2：乙腈(A)0.2%乙酸(B) 65∶35，检测波长254 nm。在选定的色谱条件下，本方法具有良好的专属性，出峰时间均在5 min内，见图1。
A.空白大鼠肝微粒体；B.灭活肝微粒体加代谢产物对照液；C.正常肝微粒体温孵探针底物的样品； 1.4OH甲苯磺丁脲； 2.甲苯磺丁脲；3.6OH氯唑沙宗； 4.氯唑沙宗；5.6βOH睾丸酮；6.睾丸酮。
图1大鼠肝微粒体中探针底物及其代谢产物的UPLC图
Fig.1UPLC chromatograms of probe substrates and metabolites in rat liver microsomal
2.6肝微粒体中亚型酶活性以各探针药物的代谢产物生成速率(V)作为酶活性指标，以mmol·g-1·min-1表示，按如下公式计算，其中C为孵育反应后代谢产物生成量(mmol·L-1)，Cprotein为微粒体蛋白的质量浓度(g·L-1)，t为孵育时间(min)。
V=C×1 000Cprotein×t
2.7各给药组大鼠亚型酶活性抑制百分率各给药组酶活性与空白对照组酶活性比较计算抑制率I，计算公式如下，其中V0为空白组酶活性，V1为给药组酶活性。
I=V0-V1V0×100%
2.8统计学处理应用SPSS 15.0软件进行单因素方差分析(Oneway ANOVA)分析，各数据均以±s表示，P<0.05为有统计学意义 ......
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