表2 引物和反应条件

    Table 2 Primers and reaction conditions

    1.4 内含子区序列扩增 根据SABATH甲基转移酶cDNA序列和基因组DNA序列比对结果，使用Primer Premier 5.0设计内含子扩增引物Lj-A1-Ir.F和Lj-A1-Ir.R，引物由北京六合华大基因有限公司合成。 随机选取表1中10个忍冬和10个红白忍冬基因组DNA作为模板进行PCR扩增，PCR反应体系(25 μL)：2.5 μL 10× Ex Taq buffer，2 μL 2.5 mmol·L^-1 dNTPs，10 μmol·L^-1引物各1 μL，1 U Ex Taq 酶，1 μL DNA 模板。反应在ABI公司的9700 型PCR扩增仪上进行。反应程序见表2。PCR产物与载体PMD19-T Vector连接，转化到DH5 α 感受态细胞中，在含有氨苄青霉素的LB培养基上进行蓝白斑筛选，鉴定阳性克隆并测序，单株植物的基因克隆数不少于10个 ......