DART—Q—TOF—MS快速鉴别桂枝茯苓胶囊中6种化学成分(1)
[摘要] 该文建立了一种快速鉴别桂枝茯苓胶囊中苦杏仁苷、丹皮酚、芍药苷、肉桂酸、没食子酸以及苯甲酸的方法，该方法采用直接实时分析(DART)离子源串联四级杆-飞行时间质谱(Q-TOF)，DART离子源以氦气为载气，温度450 ℃，样品传输速度0.2 mm·s-1；Agilent 6538 Q-TOF质谱毛细管电压1 000 V，干燥气温度350 ℃，气流速3.5 L·min-1，扫描模式为Target MS/MS扫描，扫描范围m/z 50～1 000。通过对照品与样品的一级、二级质谱图对比，快速鉴别出3批桂枝茯苓胶囊中的6种化学成分，该方法样品前处理简单，准确，快速，专属性强，能够广泛应用于中药复杂体系多成分的快速鉴别。
[关键词] 实时直接分析(DART)；四极杆串联飞行时间质谱；快速鉴别；桂枝茯苓胶囊
中药复方制剂多成分的鉴定分析是中药现代化研究的重要组成部分，传统的定性鉴别是从中药中提取分离化学成分，然后通过薄层色谱、高效液相色谱、核磁以及质谱等技术进行分析鉴定，需要复杂的分离提取过程，耗时较长[1]，而DART(direct analysis in real time) 作为一种新兴技术，能在几秒钟内分析存在于气体、液体、固体或材料表面的化合物，从而对样品无损耗定性和定量[2-5]，其工作原理是在大气压条件下通过放电使氦气产生激发态原子，并对该激发态原子进行快速加热和电场加速，使其能够解析并瞬间离子化待测样品[1，6]。目前，多种类型的质谱仪均已成功与DART联用，DART-MS联用分析将不再需要繁杂的样品制备和耗时的色谱分离，以及对化学溶剂的消耗与依赖，从而急剧缩短样品分析周期。
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桂枝茯苓胶囊是东汉张仲景的经典名方桂枝茯苓丸的现代剂型，由桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁5味中药组成，诸药相伍，共奏活血化瘀、祛痰利水、消症化积之功效，临床上常用于卵巢囊肿、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、慢性盆腔炎、痛经等妇科血瘀证的治疗[8]。张伟等[9]从牡丹皮抗子宫内膜异位症活性部位中共分离鉴定了丹皮酚、苯甲酸、β-谷甾醇、2，5-二羟基-4-甲基苯乙酮、苯甲酰芍药苷、芍药新苷、芍药苷 、氧化芍药苷8个化合物。赤芍具有清热凉血、散瘀止痛之功效，多用于活血行瘀，赤芍总苷能明显延长大鼠和小鼠的凝血时间，并能延长电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的时间，赤芍总苷通过对凝血系统和血小板功能的影响而产生抗血栓作用[10]。吴金雄从赤芍饮片中提取分离得到没食子酸、芍药苷、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、苯甲酰芍药内酯苷5个化合物[11]。桃仁中的苷类成分主要为苦杏仁苷及少量野樱苷[12]，朱萱萱等研究发现桃仁水提物、苦杏仁苷、桃仁脂肪油对二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集都有不同程度的抑制作用，作用强度以桃仁水提物最强，其次为苦杏仁苷和桃仁脂肪油[13]。桂枝具有解表散寒、温经通脉、化气行水功效，刘江云等[14]从桂枝中分离得到肉桂酸、2-甲氧基肉桂酸等11个化合物。
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根据文献报道，桂枝茯苓胶囊内容物中含有丹皮酚、苦杏仁苷、苯甲酸、没食子酸、芍药苷、肉桂酸、桂皮醛等化合物[8，15-16]， 笔者利用DART-Q-TOF-MS联用技术，对桂枝茯苓胶囊中苦杏仁苷、丹皮酚、芍药苷、肉桂酸、没食子酸以及苯甲酸6种化学成分进行研究，建立了DART-Q-TOF-MS检测桂枝茯苓胶囊中多成分的快速定性检测方法，该方法快速简便，专属性强，准确度高。
1 材料
Agilent 6538 Q-TOF质谱仪；DART SVP实时直接分析离子源(美国Ion Sense公司)；筛网(直径0.0019英寸，美国IonSense公司提供)。
对照品苦杏仁苷(批号110820-200403)、丹皮酚(批号110708-200505)、芍药苷(批号110736-201035)、肉桂酸(批号110786-200503)、没食子酸(批号110831-200803)以及苯甲酸(批号100419-200301)均购自中国食品药品检定研究院；桂枝茯苓胶囊样品(批号110601，101101，101201)由江苏康缘药业股份有限公司提供；其他试剂均为色谱纯。
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取苦杏仁苷、丹皮酚、芍药苷、肉桂酸、没食子酸、苯甲酸各对照品适量，分别加甲醇溶解并制成质量浓度分别为86.0，42.8，67.0，12.0，617.2，322.0 mg·L-1的溶液作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备 取本品内容物0.25 g，置锥形瓶中，加入50%甲醇25 mL超声提取30 min，过滤，取滤液作为供试品溶液Ⅰ，用于苦杏仁苷和芍药苷的测定；取供试品溶液Ⅰ适量，经50%甲醇稀释500倍后，作为供试品溶液Ⅱ，用于没食子酸、肉桂酸、苯甲酸和丹皮酚的测定。
2.3 DART-MS样品制备 取7 mm×10孔金属模板，将活化好的条状筛网置于模板内，固定好后，于各孔中心处均匀点样10 μL，于室温下挥干后，置于样品传输器上，即可。
2.4 DART-Q-TOF-MS条件 DART：以氦气为载气，温度450 ℃，电压350 V(±)，1.5 mm×90 mm陶瓷管，7 mm×10孔金属模板，传输速度0.2 mm·s-1。
Q-TOF质谱条件：采用正、负离子模式，毛细管电压1 000 V，干燥气温度350 ℃，干燥气流速3.5 L·min-1，八级杆射频电压250 V，一级质谱扫描范围m/z 50～1 000；二级质谱扫描范围m/z 50～1 000，碰撞能10，15，20 V。, http://www.100md.com(张伟 王雪 秦建平 李艳静 毕宇安 王振中 萧伟)
[关键词] 实时直接分析(DART)；四极杆串联飞行时间质谱；快速鉴别；桂枝茯苓胶囊
中药复方制剂多成分的鉴定分析是中药现代化研究的重要组成部分，传统的定性鉴别是从中药中提取分离化学成分，然后通过薄层色谱、高效液相色谱、核磁以及质谱等技术进行分析鉴定，需要复杂的分离提取过程，耗时较长[1]，而DART(direct analysis in real time) 作为一种新兴技术，能在几秒钟内分析存在于气体、液体、固体或材料表面的化合物，从而对样品无损耗定性和定量[2-5]，其工作原理是在大气压条件下通过放电使氦气产生激发态原子，并对该激发态原子进行快速加热和电场加速，使其能够解析并瞬间离子化待测样品[1，6]。目前，多种类型的质谱仪均已成功与DART联用，DART-MS联用分析将不再需要繁杂的样品制备和耗时的色谱分离，以及对化学溶剂的消耗与依赖，从而急剧缩短样品分析周期。
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桂枝茯苓胶囊是东汉张仲景的经典名方桂枝茯苓丸的现代剂型，由桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁5味中药组成，诸药相伍，共奏活血化瘀、祛痰利水、消症化积之功效，临床上常用于卵巢囊肿、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、慢性盆腔炎、痛经等妇科血瘀证的治疗[8]。张伟等[9]从牡丹皮抗子宫内膜异位症活性部位中共分离鉴定了丹皮酚、苯甲酸、β-谷甾醇、2，5-二羟基-4-甲基苯乙酮、苯甲酰芍药苷、芍药新苷、芍药苷 、氧化芍药苷8个化合物。赤芍具有清热凉血、散瘀止痛之功效，多用于活血行瘀，赤芍总苷能明显延长大鼠和小鼠的凝血时间，并能延长电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的时间，赤芍总苷通过对凝血系统和血小板功能的影响而产生抗血栓作用[10]。吴金雄从赤芍饮片中提取分离得到没食子酸、芍药苷、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、苯甲酰芍药内酯苷5个化合物[11]。桃仁中的苷类成分主要为苦杏仁苷及少量野樱苷[12]，朱萱萱等研究发现桃仁水提物、苦杏仁苷、桃仁脂肪油对二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集都有不同程度的抑制作用，作用强度以桃仁水提物最强，其次为苦杏仁苷和桃仁脂肪油[13]。桂枝具有解表散寒、温经通脉、化气行水功效，刘江云等[14]从桂枝中分离得到肉桂酸、2-甲氧基肉桂酸等11个化合物。
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1 材料
Agilent 6538 Q-TOF质谱仪；DART SVP实时直接分析离子源(美国Ion Sense公司)；筛网(直径0.0019英寸，美国IonSense公司提供)。
对照品苦杏仁苷(批号110820-200403)、丹皮酚(批号110708-200505)、芍药苷(批号110736-201035)、肉桂酸(批号110786-200503)、没食子酸(批号110831-200803)以及苯甲酸(批号100419-200301)均购自中国食品药品检定研究院；桂枝茯苓胶囊样品(批号110601，101101，101201)由江苏康缘药业股份有限公司提供；其他试剂均为色谱纯。
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2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取苦杏仁苷、丹皮酚、芍药苷、肉桂酸、没食子酸、苯甲酸各对照品适量，分别加甲醇溶解并制成质量浓度分别为86.0，42.8，67.0，12.0，617.2，322.0 mg·L-1的溶液作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备 取本品内容物0.25 g，置锥形瓶中，加入50%甲醇25 mL超声提取30 min，过滤，取滤液作为供试品溶液Ⅰ，用于苦杏仁苷和芍药苷的测定；取供试品溶液Ⅰ适量，经50%甲醇稀释500倍后，作为供试品溶液Ⅱ，用于没食子酸、肉桂酸、苯甲酸和丹皮酚的测定。
2.3 DART-MS样品制备 取7 mm×10孔金属模板，将活化好的条状筛网置于模板内，固定好后，于各孔中心处均匀点样10 μL，于室温下挥干后，置于样品传输器上，即可。
2.4 DART-Q-TOF-MS条件 DART：以氦气为载气，温度450 ℃，电压350 V(±)，1.5 mm×90 mm陶瓷管，7 mm×10孔金属模板，传输速度0.2 mm·s-1。
Q-TOF质谱条件：采用正、负离子模式，毛细管电压1 000 V，干燥气温度350 ℃，干燥气流速3.5 L·min-1，八级杆射频电压250 V，一级质谱扫描范围m/z 50～1 000；二级质谱扫描范围m/z 50～1 000，碰撞能10，15，20 V。, http://www.100md.com(张伟 王雪 秦建平 李艳静 毕宇安 王振中 萧伟)