不同产地南五味子中木脂素分析研究(1)
[摘要] 采用UPLC-TQ-MS技术对不同产地南五味子药材中的7种木脂素类成分进行分析评价，为南五味子的科学药用提供实验依据。结果显示秦岭以南，东侧的商洛市柞水县、山阳县所产南五味子中主要含五味子酯甲、五味子甲素;宝鸡市眉县，安康市石泉县、宁陕县，汉中市略阳县所产的南五味子主要含有安五酯素，其中宁陕县样品中五味子甲素含量也较高;而位于秦巴山区腹地的汉中市南郑县所产的南五味子主要含五味子酚、五味子甲素。总之不同产地的南五味子所含木脂素种类和含量差别很大，在实际应用中应结合现代药理实验和临床研究，根据所治疗疾病相关的主要功效成分对不同产地南五味子药材加以区别入药，以达到药物的最佳疗效。
[关键词] 南五味子;木脂素;LC-MS
[收稿日期] 2014-08-05
[基金项目] 国家自然科学基金面上项目(81373978);陕西省重点科技创新新团队(2012KTC-20)
, 百拇医药
[通信作者] *唐志书，博士，教授，主要从事中药资源开发与综合利用研究，E-mail：tzs6565@163.com
[作者简介] 杨洁，硕士研究生，Tel：18691017877，E-mail：makikoesumi@hotmail.com
南五味子为木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils 的干燥成熟果实。始载于《神农本草经》，列为上品，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效[1]。南五味子广泛分布于我国陕西、河南、安徽、湖北等地[2]。《唐本草》中记载有五味子“出蒲州及蓝田山中”，宋《图经本草》也记述，五味子“陕西州郡尤多”。秦岭山脉自古就是南五味子一大主产区，主要分布在安康、汉中、西安、渭南、太白山、眉县等地[3]。研究发现南五味子中含有大量的木脂素类成份，具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用[4]。如五味子酯类成分能显著降低谷丙转氨酶[5]，总木脂素部位具有镇静、催眠等多种药理作用[6]。南五味子为中医临床常用的重要收涩药，已有许多以南五味子为源药材的药物上市销售，如护肝片、五酯滴丸、五味子糖浆等。其临床应用十分广泛，而保证原药材的质量对临床疗效至关重要。已有学者研究产于秦岭东西南北的南五味子木脂素种类、含量差别很大[7-8]，但其选点较少，所测成分单一，不能较为全面的反映南五味子药材的品质。基于此，本文对多产地多批次的南五味子药材采用高效准确的UPLC-TQ-MS技术进行多成分分析，以期为南五味子药材的合理利用提供科学依据。
, 百拇医药
1 材料
1.1 仪器
Waters ACQUITY UPLC系统(Waters公司，Milford，USA);Xevo TQ检测器(Waters公司);MassLynx4.1质谱工作站软件(Waters公司);ML204/MS105型电子天平(梅特勒-托利多公司);DHG9240型鼓风干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂);EPED超纯水系统(南京易普达易科技发展有限公司);KQ250E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);Anke GL-16GII型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2 试药与试剂
对照品五味子乙素(批号110765-200710)、五味子甲素(批号 110764-201111)、安五脂素(批号111844-201102)、五味子酯甲(批号111529-200604)，五味子醇甲(批号 110857-201211)购自中国食品药品检定研究院;对照品五味子酚(69363-14-0)、五味子丙素(61301-33-5)购自成都曼思特生物科技有限公司。以上对照品经HPLC-PDA检测纯度均大于98%;甲酸(Merck，德国)和乙腈(Tedia，美国)均为色谱纯，超纯水(自制)，其他试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
2 方法
2.1 样品的采集与加工方法
南五味子干燥样品收集自陕西9个地区，经南京中医药大学段金廒教授鉴定为木兰科植物华中五味子的干燥成熟果实。粉碎，过3号筛。样品信息见表1。
表1 南五味子产地信息
Table 1 Sample of Schisandra sphenantherae
样品编号产地
SSBB 1～SSBB 10商洛市山阳县板岩镇北沟寺村
SZYY 1～SZYY 10商洛市柞水县营盘镇药王堂村
HLBZ 1～HLBZ 10汉中市略阳县白水江镇张家坪村
, http://www.100md.com
HNHY 1～HNHY 10汉中市南郑县黄官镇庙坝村
ASCC 1～ASCC 10安康市石泉县长阳乡长阳村
ANGX 1～ANGX 5安康市宁陕县广货街镇蒿沟村
ANJJ 1～ANJJ 5安康市宁陕县江口镇江口村
BMTT 1～BMTT 5宝鸡市眉县汤峪镇铜峪村
BMYH 1～BMYH 5宝鸡市眉县营头镇红河村
2.2 含量测定方法
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为五味子甲素513 mg·L-1、五味子乙素203 mg·L-1、五味子酯甲103 mg·L-1、五味子酚126 mg·L-1、安五酯素387 mg·L-1、五味子丙素176 mg·L-1、五味子醇甲323 mg·L-1的对照品溶液。分别精密吸取上述各对照品溶液若干配制成浓度分别为73.3，29.0，14.7，18.0，55.3，25.1，46.1 mg·L-1的混合对照品储备液，4 ℃条件下贮藏备用。取混合对照品储备液适量，采用逐级稀释的方法，制成不同浓度的对照品应用液，各成分浓度系列见表2，供考察线性范围和含量测定用。, 百拇医药(杨洁 段金廒 李国龙 朱振华 朱太雷 钱大玮 唐志书)
[关键词] 南五味子;木脂素;LC-MS
[收稿日期] 2014-08-05
[基金项目] 国家自然科学基金面上项目(81373978);陕西省重点科技创新新团队(2012KTC-20)
, 百拇医药
[通信作者] *唐志书，博士，教授，主要从事中药资源开发与综合利用研究，E-mail：tzs6565@163.com
[作者简介] 杨洁，硕士研究生，Tel：18691017877，E-mail：makikoesumi@hotmail.com
南五味子为木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils 的干燥成熟果实。始载于《神农本草经》，列为上品，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效[1]。南五味子广泛分布于我国陕西、河南、安徽、湖北等地[2]。《唐本草》中记载有五味子“出蒲州及蓝田山中”，宋《图经本草》也记述，五味子“陕西州郡尤多”。秦岭山脉自古就是南五味子一大主产区，主要分布在安康、汉中、西安、渭南、太白山、眉县等地[3]。研究发现南五味子中含有大量的木脂素类成份，具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用[4]。如五味子酯类成分能显著降低谷丙转氨酶[5]，总木脂素部位具有镇静、催眠等多种药理作用[6]。南五味子为中医临床常用的重要收涩药，已有许多以南五味子为源药材的药物上市销售，如护肝片、五酯滴丸、五味子糖浆等。其临床应用十分广泛，而保证原药材的质量对临床疗效至关重要。已有学者研究产于秦岭东西南北的南五味子木脂素种类、含量差别很大[7-8]，但其选点较少，所测成分单一，不能较为全面的反映南五味子药材的品质。基于此，本文对多产地多批次的南五味子药材采用高效准确的UPLC-TQ-MS技术进行多成分分析，以期为南五味子药材的合理利用提供科学依据。
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1 材料
1.1 仪器
Waters ACQUITY UPLC系统(Waters公司，Milford，USA);Xevo TQ检测器(Waters公司);MassLynx4.1质谱工作站软件(Waters公司);ML204/MS105型电子天平(梅特勒-托利多公司);DHG9240型鼓风干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂);EPED超纯水系统(南京易普达易科技发展有限公司);KQ250E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);Anke GL-16GII型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2 试药与试剂
对照品五味子乙素(批号110765-200710)、五味子甲素(批号 110764-201111)、安五脂素(批号111844-201102)、五味子酯甲(批号111529-200604)，五味子醇甲(批号 110857-201211)购自中国食品药品检定研究院;对照品五味子酚(69363-14-0)、五味子丙素(61301-33-5)购自成都曼思特生物科技有限公司。以上对照品经HPLC-PDA检测纯度均大于98%;甲酸(Merck，德国)和乙腈(Tedia，美国)均为色谱纯，超纯水(自制)，其他试剂均为分析纯。
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2 方法
2.1 样品的采集与加工方法
南五味子干燥样品收集自陕西9个地区，经南京中医药大学段金廒教授鉴定为木兰科植物华中五味子的干燥成熟果实。粉碎，过3号筛。样品信息见表1。
表1 南五味子产地信息
Table 1 Sample of Schisandra sphenantherae
样品编号产地
SSBB 1～SSBB 10商洛市山阳县板岩镇北沟寺村
SZYY 1～SZYY 10商洛市柞水县营盘镇药王堂村
HLBZ 1～HLBZ 10汉中市略阳县白水江镇张家坪村
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HNHY 1～HNHY 10汉中市南郑县黄官镇庙坝村
ASCC 1～ASCC 10安康市石泉县长阳乡长阳村
ANGX 1～ANGX 5安康市宁陕县广货街镇蒿沟村
ANJJ 1～ANJJ 5安康市宁陕县江口镇江口村
BMTT 1～BMTT 5宝鸡市眉县汤峪镇铜峪村
BMYH 1～BMYH 5宝鸡市眉县营头镇红河村
2.2 含量测定方法
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为五味子甲素513 mg·L-1、五味子乙素203 mg·L-1、五味子酯甲103 mg·L-1、五味子酚126 mg·L-1、安五酯素387 mg·L-1、五味子丙素176 mg·L-1、五味子醇甲323 mg·L-1的对照品溶液。分别精密吸取上述各对照品溶液若干配制成浓度分别为73.3，29.0，14.7，18.0，55.3，25.1，46.1 mg·L-1的混合对照品储备液，4 ℃条件下贮藏备用。取混合对照品储备液适量，采用逐级稀释的方法，制成不同浓度的对照品应用液，各成分浓度系列见表2，供考察线性范围和含量测定用。, 百拇医药(杨洁 段金廒 李国龙 朱振华 朱太雷 钱大玮 唐志书)