应用高内涵技术研究桂枝茯苓胶囊抗炎及免疫调节活性成分(1)
[摘要]该文旨在研究桂枝茯苓胶囊中17个成分的抗炎与免疫调节活性。主要选择LPS刺激的RAW264.7细胞为炎症模型，考察17个成分的体外抗炎作用，ELISA法检测IL-1β，TNF-α，PGE2释放水平、免疫荧光法检测COX-2表达水平;选择脾脏淋巴细胞体外活化增殖为模型，考察17个成分的免疫调节活性，MTT法和Hoechst 33342染色法检测细胞增殖水平。结果显示，在LPS诱导RAW264.7释放炎症因子模型上筛选出10个活性较强成分;在脾脏淋巴细胞活化增殖模型上筛选出10个活性较强成分。剔除重复成分，在上述2个模型上共计筛选出强活性成分15个。以上结果表明，这15个成分可能是桂枝茯苓胶囊抗炎、调节免疫，治疗相关疾病如盆腔炎等的主要活性成分。
[关键词]桂枝茯苓胶囊;盆腔炎;炎症因子;免疫调节;高内涵
Study on anti-inflammation and immunoloregulation effect of Guizhi Fuling
, http://www.100md.com
capsule ingredients using high content screening
WANG Yan-ru1，2， LI Na1，2， CAO Liang1，2， ZHANG Chen-feng1，2， WANG Tuan-jie1，2，DING Gang1，2， WANG Zhen-zhong1，2， XIAO Wei1，2*
(1. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.， Ltd.， Lianyungang 222001， China;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process， Lianyungang 222001， China)
[Abstract]The present study sought to investigate the anti-inflammation and immunoloregulation effect of 17 Guizhi Fuling capsule ingredients. The anti-inflammatory ingredients on LPS-induced RAW264.7 cell injury were assessed with ELISA and immunofluorescence. The release of IL-1β， TNF-α， PGE2 were detected with ELISA and the expression of COX-2 was detected with immunofluorescence. The effects of them on promoting splenic lymphocyte proliferation were assessed with MTT and Hoechst 33342 staining method. The results showed that 15 ingredients had obviously anti-inflammatory activity on LPS- induced injury and play the immunoloregulation roles. This study suggested that the 15 ingredients may be the active ingredients on pelvic infection.
, 百拇医药
[Key words]Guizhi Fuling capsule; pelvic infection; inflammatory cytokines; immunoloregulation; HCS
doi：10.4268/cjcmm20150604
盆腔炎包括子宫内膜炎、输卵管炎、子宫腹膜炎等，现代医学认为盆腔炎发病原因是由于免疫功能失调和盆腔组织受病原体感染所致[1]。采用抗生素类药物治疗盆腔炎，虽然可以抑制病原微生物的繁殖或直接将其杀死，但同时也杀死了大量有益菌，破坏阴道菌群平衡，而妇科炎症难以根治，常反复发作，长期使用抗生素会使得病菌产生耐药性，且毒副作用大，破坏人体正常的生理机能[2]。
中药在治疗盆腔炎方面具有重大优势。中药具有多成分、多靶点、多途径、毒副作用小的特点，可长期用药治疗。桂枝茯苓胶囊来源于汉代张仲景《金匮要略》桂枝茯苓方，由桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍配伍而成，具有活血、化瘀、消癥的功效，临床上常用于治疗慢性盆腔炎等妇科疾病，取得良好疗效。免疫功能失调为盆腔炎发病原因之一，研究显示，桂枝茯苓胶囊可显著提高子宫内膜异位症模型大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞数[3]，也能提高慢性盆腔炎模型大鼠CD3+，CD4+T细胞数量百分比[4]，淋巴细胞增殖活化程度是机体免疫调节能力的体现，桂枝茯苓胶囊可能通过调控淋巴细胞的免疫功能，达到治疗子宫内膜异位症、盆腔炎等妇科疾病的目的。
有研究发现，比格犬和大鼠口服桂枝茯苓胶囊后，芍药苷、白芍苷、苦杏仁苷、肉桂酸和丹皮酚在体内均有一定暴露量[5-6]。本实验室前期研究发现，桂枝茯苓胶囊共有16个入血小分子没食子酸、芍药苷、桂皮醛、丹皮酚、苦杏仁苷、去氢茯苓酸、肉桂酸、苯甲酰芍药苷、茯苓酸、槲皮素、五没食子酰葡萄糖、香豆素、去氢土莫酸、白芍苷、山柰酚和棕榈酸，推测它们可能是桂枝茯苓胶囊发挥药效的主要效应成分。另外大分子类成分茯苓多糖在桂枝茯苓胶囊制剂中的含量较高(约48%左右)。本文对这16个入血小分子及茯苓多糖的抗炎及免疫调节活性进行研究。, 百拇医药(王俨如 李娜 曹亮 章晨峰 王团结 丁岗 王振中 萧伟)
[关键词]桂枝茯苓胶囊;盆腔炎;炎症因子;免疫调节;高内涵
Study on anti-inflammation and immunoloregulation effect of Guizhi Fuling
, http://www.100md.com
capsule ingredients using high content screening
WANG Yan-ru1，2， LI Na1，2， CAO Liang1，2， ZHANG Chen-feng1，2， WANG Tuan-jie1，2，DING Gang1，2， WANG Zhen-zhong1，2， XIAO Wei1，2*
(1. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.， Ltd.， Lianyungang 222001， China;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process， Lianyungang 222001， China)
[Abstract]The present study sought to investigate the anti-inflammation and immunoloregulation effect of 17 Guizhi Fuling capsule ingredients. The anti-inflammatory ingredients on LPS-induced RAW264.7 cell injury were assessed with ELISA and immunofluorescence. The release of IL-1β， TNF-α， PGE2 were detected with ELISA and the expression of COX-2 was detected with immunofluorescence. The effects of them on promoting splenic lymphocyte proliferation were assessed with MTT and Hoechst 33342 staining method. The results showed that 15 ingredients had obviously anti-inflammatory activity on LPS- induced injury and play the immunoloregulation roles. This study suggested that the 15 ingredients may be the active ingredients on pelvic infection.
, 百拇医药
[Key words]Guizhi Fuling capsule; pelvic infection; inflammatory cytokines; immunoloregulation; HCS
doi：10.4268/cjcmm20150604
盆腔炎包括子宫内膜炎、输卵管炎、子宫腹膜炎等，现代医学认为盆腔炎发病原因是由于免疫功能失调和盆腔组织受病原体感染所致[1]。采用抗生素类药物治疗盆腔炎，虽然可以抑制病原微生物的繁殖或直接将其杀死，但同时也杀死了大量有益菌，破坏阴道菌群平衡，而妇科炎症难以根治，常反复发作，长期使用抗生素会使得病菌产生耐药性，且毒副作用大，破坏人体正常的生理机能[2]。
中药在治疗盆腔炎方面具有重大优势。中药具有多成分、多靶点、多途径、毒副作用小的特点，可长期用药治疗。桂枝茯苓胶囊来源于汉代张仲景《金匮要略》桂枝茯苓方，由桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍配伍而成，具有活血、化瘀、消癥的功效，临床上常用于治疗慢性盆腔炎等妇科疾病，取得良好疗效。免疫功能失调为盆腔炎发病原因之一，研究显示，桂枝茯苓胶囊可显著提高子宫内膜异位症模型大鼠脾脏CD4+T淋巴细胞数[3]，也能提高慢性盆腔炎模型大鼠CD3+，CD4+T细胞数量百分比[4]，淋巴细胞增殖活化程度是机体免疫调节能力的体现，桂枝茯苓胶囊可能通过调控淋巴细胞的免疫功能，达到治疗子宫内膜异位症、盆腔炎等妇科疾病的目的。
有研究发现，比格犬和大鼠口服桂枝茯苓胶囊后，芍药苷、白芍苷、苦杏仁苷、肉桂酸和丹皮酚在体内均有一定暴露量[5-6]。本实验室前期研究发现，桂枝茯苓胶囊共有16个入血小分子没食子酸、芍药苷、桂皮醛、丹皮酚、苦杏仁苷、去氢茯苓酸、肉桂酸、苯甲酰芍药苷、茯苓酸、槲皮素、五没食子酰葡萄糖、香豆素、去氢土莫酸、白芍苷、山柰酚和棕榈酸，推测它们可能是桂枝茯苓胶囊发挥药效的主要效应成分。另外大分子类成分茯苓多糖在桂枝茯苓胶囊制剂中的含量较高(约48%左右)。本文对这16个入血小分子及茯苓多糖的抗炎及免疫调节活性进行研究。, 百拇医药(王俨如 李娜 曹亮 章晨峰 王团结 丁岗 王振中 萧伟)