基于线粒体细胞色素B(cyt b) 基因条形码的中药海蛇品种鉴定(2)
1.4DNA提取取海蛇干燥肌肉样品30 mg，剪碎放入 1.5 mL EP管中，使用天根海洋生物基因组DNA提取试剂盒提取样品总DNA。具体步骤如下，向装有样品的EP管中加入GA缓冲液200 μL，再加入Proteinase K 20 μL， 混匀，56 ℃放置2 h，取上清液加入200 μL的GB溶液，混匀，70 ℃放置10 min;加入200 μL无水乙醇并混匀：将液体转移到吸附柱中，离心弃废液;加入GD缓冲液500 μL，离心弃废液;加入PW缓冲液，离心弃废液，并重复操作1次，空管高速离心2 min，室温晾干30 min，加入100 μL 双蒸水洗脱DNA，离心即得样品总DNA模板，-20 ℃保存备用。
1.5PCR扩增电泳检测，PCR体系总体积为20 μL。其中包含2×PCR Reagent 10 μL、模板DNA 4 μL，双蒸水5 μL，cyt b引物各0.5 μL。引物序列及PCR反应程序见表2。扩增结束后以1%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像分析系统分析。
1.6PCR产物纯化PCR产物经检测确认扩增成功后需要进一步纯化 ......
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1.5PCR扩增电泳检测，PCR体系总体积为20 μL。其中包含2×PCR Reagent 10 μL、模板DNA 4 μL，双蒸水5 μL，cyt b引物各0.5 μL。引物序列及PCR反应程序见表2。扩增结束后以1%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像分析系统分析。
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