临床用量的复方黄黛片及大剂量雄黄对大鼠肝脏主要药物代谢酶的影响(3)
2.4 荧光定量PCR技术测定各受试物对大鼠肝脏CYP450酶mRNA水平的影响2.4.1 肝组织总RNA的提取 大鼠处死后迅速取出肝脏，至于液氮中预冻，-80 ℃保存。按CWBIO公司Ultra RNA提取试剂盒说明书提取肝脏总RNA。电泳分析表明18S和28S条带清晰可见，A260/A280在1.8～2.0，总RNA片段完整未降解，可用。
2.4.2 逆转录(RT)反应 RNA上样量为1 μg，依据测得的RNA浓度计算加入的体积，另加入2×TS Reaction Mix 10 μL，RT/RI Enzyme Mix 1 μL，Anchored Oligo(dT)18 1 μL，RNase-free Water补足反应体系至20 μL，混匀。逆转录条件为42 ℃，30 min，85 ℃，5 min，逆转录产物-20 ℃保存待用。
2.4.3 实时定量PCR(RT-qPCR)反应测定mRNA表达水平 RT-qPCR反应依据TransScript公司qPCR试剂盒说明书进行 ......
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