燕窝DNA条形码的鉴定研究(2)
本研究所有样品均经中山大学药学院蒋林研究员鉴定,凭证样本保存于中山大学药学院。实验样本信息见表1,从Genbank下载36条Cytb序列,Gen Bank登录号等信息见表2。2 方法
2.1 总DNA提取 将燕窝样品于50 ℃烘48 h,研磨成细粉,过120目筛,密封保存于-20 ℃冰箱备用。采用口腔拭子基因组DNA提取试剂盒提取总DNA。称取燕窝样品约40 mg,按照试剂盒操作说明进行总DNA的提取,利用微量定量仪对提取DNA的浓度和纯度进行检测。
2.2 PCR扩增及扩增产物的检测 扩增序列的引物为Genbank中上传最多的Cytb基因序列[13-14],见表3。PCR反应体系为20 μL:其中DNA模板1 μL,正向引物(10 μmol·L-1) 1 μL,反向引物(10 μmol·L-1) 1 μL,2×Taq PCR StarMix 10 μL, ddH2O 7 μL。PCR反应条件的设置:94 ℃,2 min;94 ℃,30 s;55~65 ℃,30 s;72 ℃,1 min,35个循环;72 ℃,5 min。取5 μL的PCR 产物 ......
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