姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤时内质网应激的影响(3)
1.2.6 逆转录-PCR(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织CHOP、ATF4和XBP1 mRNA的表达 3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,迅速摘除眼球,在冰水浴中环角巩膜缘切开,弃去眼前节和晶体,外翻眼球,解剖显微镜下剥离视网膜,迅速用预冷的生理盐水冲洗后放入液氮冷却,-80 ℃冻存。取视网膜组织100 mg,提取总RNA,紫外分光光度计测定总RNA浓度,OD260/OD280比值在1.78~2.0范围内的RNA样品为合格样品。应用RT-PCR测定CHOP、ATF4和XBP1 mRNA表达水平。各目的基因的引物序列如下:CHOP:正义链:5′-GGGAAACAGCGCATGAAGGA-3′,反义链:5′-GCGTGATGGTGCTGGGTACA-3′;ATF4:正义链:5′-CCAGGGCCCACCAGACAGT-3′,反义链:5′-CGCCAGTGAGGGCCTTCCTGC-3′;XBP1:正义链:5′-CTGCCGCTCATGGTTCCGGG-3′ ......
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