慢性炎性痛电针镇痛频率优选及其DRG TRPV1活化机制研究(3)
PWL检测:采用足底热辐射测痛仪检测各组大鼠基础痛、模后24 h、模后1 d、模后3 d和模后7 d电针治疗后5个时间点PWL。测量前,各组大鼠适应环境3 d。测量时,将大鼠置于玻璃板上的透明有机玻璃箱内,室温保持(25±2)℃,待大鼠安静后(即停止梳理毛发和探索性活动,约15 min)。将测试仪上的“十”字形标记置于大鼠右后足足底中央并避开足垫,开启仪器用强光照射大鼠右后足足底中央,照射开始至大鼠出现抬腿回避的时间为大鼠的PWL测量5次,每次间隔5 min。去除最低值和最高值,取3次结果的平均值为测定结果。为防止大鼠热辐射烫伤,将大鼠的PWL测定时间上限值设定为20 s,温度上限值设定为35 ℃。取材及样本处理:于电针治疗后7 d,以1%戊巴比妥(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。开胸暴露心脏,经升主动脉快速灌注4 ℃生理盐水。取大鼠患侧L4-6 DRG放入预冷的EP管内,保存于-80 ℃冰箱待用。
免疫印迹法测大鼠L4-6 DRG p-TRPV1膜蛋白表达组织加入RIPA裂解液和膜蛋白提取试剂 ......
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