芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因实验条件优化研究
痰标本,结核分枝杆菌DNA,基因芯片实验条件
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王万相 郭乃洲 严爱华 马达 马力 周步全 景奉香 唐向荣 朱殊
【摘要】目的优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的最佳条件。方法自制DNA芯片,每条寡核苷酸探针片段长度为19bp,点样浓度在15μmol/L,以痰液为待检标本,分别用不同引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶链反应;分别在不同时间、温度下进行杂交,分别在不同酶作用时间和显色时间进行分析,比较不同条件芯片检测结果。结果引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度分别为0.2μmol/L、1mmol/L、0.2mmol/L、5U效果最好,杂交时间和杂交温度分别为0.5h、60℃信号最强,酶作用时间和显色时间均为0.5h时得到最佳结果。结论在最佳条件下,该技术的重复性、特异性、灵敏度与可靠性均较好,适合基层医院推广应用。
【关键词】 痰标本 结核分枝杆菌DNA 显色法 耐药基因 基因芯片实验条件
【基金】盐城市科技局、卫生局科技发展计划项目(编号YK2005105)
【分类号】R450
结核病是当今世界上主要传染病的死因,常用的结核杆菌基因突变检测方法有PCR产物直接测序、PCR-SSCP、PCR-RFLP等,每种方法虽有自己的优点,但同时存在缺陷。基因芯片技术是物理学、微电子学与生命科学等学科的交叉结合,具有高灵敏、高通量、同时、平行、快速检测等优点,弥补
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摘要：目的优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的最佳条件。方法自制DNA芯片，每条寡核苷酸探针片段长度为19bp，点样浓度在15μmol/L，以痰液为待检标本，分别用不同引物、Mg2、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶链反应；分别在不同时间、温度下进行杂交，分别在不同酶作用时间和显色时间进行分析，比较不同条件芯片检测结果。结果 引物、Mg22、核苷酸、DNA聚合酶浓度分别为0.2μmoL、1mmoL、0.2mmol/L、5u效果最好，杂交时间和杂交温度分别为0.5h、60℃信号最强，酶作用时间和显色时间均为0.5h时得到最佳结果。结论在最佳条件下：该技术的重复性、特异性、灵敏度与可靠性均较好，适合基层医院推广应用。
关键词：痰标本；结核分枝杆菌DNA；显色法；耐药基因；基因芯片实验条件
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