HPLC测定复方维生素注射液中维生素A、E、K1的含量(1)
【摘要】 目的 探讨高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定复方维生素注射液A、E、K1含量的可行性。方法 采用HPLC法，C18色谱柱(150 mm×46 mm,5 μm)，流动相：甲醇-酒精(80∶20)，检测波长270 nm。结果 维生素A棕榈酸酯在125~125.5 μg/ml之间线性良好(r=0.999 9),平均回收率为99.38%，RSD为1.36%；
维生素E在125~125.5 μg/ml之间线性良好(r=0.999 9),平均回收率为95.87%，RSD为0.95%。维生素K1在16.5~166.5 μg/m之间线性良好(r=0.999 8)，平均回收率为98.08%，RSD为1.57%。结论 HPLC法测定复方维生素注射液维生素A、E、K1的含量专属性强，灵敏度高，准确性好。
【关键词】高效液相色谱法；维生素A；维生素E；维生素K1
, 百拇医药
Determination content ofcompound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography
XI Ying.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of BengbuMedicalCollege,Bengbu ，Anhui233004，China
【Abstract】 Objective To determine the contents in compound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods HPLC was used C18column(150 mm×46 mm,5 μm)was selected,the mobile phase was methanol-alcohol(80∶20).Detection was performed by UV with wavelength of 270 nm.Results A linearity of retinyl palmitate was obtained from 125 to 125.5 μg/ml with good correlation(r=0.999 9).The average recovery of retinyl palmitate was 99.38%,and RSD Was 1.36%.A linearity of vitamin E was obtained from 125 to 1251 μg/mlwith good correlation(r=0.999 8).The average recovery of vitamin E was 98.87%,and RSD was 0.95%.A linearity of vitamin K1 was obtained from 16.5 to 166.5 μg/ml with good correlation(r=0.999).The average recovery of vitamin K1 was 98.08%,and RSD was 1.57%.Conclusion The RP-HPLC is sensitive and accurate in determining thecontents in compound vitamin injection.
, 百拇医药
【Key words】Highperformance liquid chromatography；Vitamin A；Vitamin E；Vitamin K1
维生素(vitamin)是维持人体正常物质代谢和某些特殊生理功能不可缺少的低分子有机化合物，主要参与各种酶的组成，因其结构和理化性质不同，使其各具特殊的生理功能。复方维生素注射液可作为全营养静脉输液的添加剂,以满足每日的维生素需要[1]。近来有系统测定维生素的报道，但多数是报道纯品维生素的分离分析。本文应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定复方维生素注射液A、E、K1含量，现作报告。
1 仪器与试剂
仪器：岛津LC-10A高效液相色谱仪系统，包括LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，C-R8A色谱数据处理仪。色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150 mm×46 mm，5 μm),不锈钢柱(Shin-pack CLC-ODS)。试剂：甲醇、酒精均为分析纯。维生素A棕榈酸酯对照品[由巴斯夫(中国)有限公司提供]；维生素E对照品、维生素K1对照品(由中国药品生物制品检定所提供)。复方维生素注射液样品批号：041204，041206，041208
, 百拇医药
(由上海第一生化药业有限公司提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：shin-pack CLC-ODS C18柱(150 mm×46 mm,5 μm)。流动相：甲醇-酒精(80∶20)，检测波长270 nm，流速0.5 ml/min。进样量20 μl。在上述条件下，维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1的保留时间分别约为39.98、23.96、18.41 min。
2.2 对照品溶液的制备 避光条件下精密称取维生素A棕榈酸酯约62.5 mg、维生素E 625 mg、维生素K1 83.3 mg，置100 ml量瓶中，加无水酒精使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀(临用前制备)。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备 避光条件下精密量取样品溶液1 ml，再精密加水1 ml，然后精密量取1 ml慢速上sep-pake18柱(预先用20%酒精洗涤)，推尽，精密量取无水酒精5 ml慢速洗脱，推尽，收集无水酒精液4 ml的洗脱液置容器中，备用。
2.4 专属性试验 按上述色谱条件和试验方法，取本品空白辅料1 ml照供试品溶液配制项下的方法制成空白辅料溶液，将上述对照品溶液、供试品溶液及空白辅料溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱。本方法能有效分离复方维生素注射液A、E、K1含量，且空白辅料对本品主药测定无干扰。
2.5 标准曲线的制备 取对照品，维生素A棕榈酸酯约6.25 mg、维生素E约625 mg和维生素K1约83.3 mg分别精密称定，置100 ml量瓶中；加无水酒精溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取该溶液1、3、5、7和10 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀，分别量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1 3种组分的浓度(C)为横坐标，以3种组分的峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程，并绘制3种组分标准曲线，结果见表1。, 百拇医药(郗 颖)
维生素E在125~125.5 μg/ml之间线性良好(r=0.999 9),平均回收率为95.87%，RSD为0.95%。维生素K1在16.5~166.5 μg/m之间线性良好(r=0.999 8)，平均回收率为98.08%，RSD为1.57%。结论 HPLC法测定复方维生素注射液维生素A、E、K1的含量专属性强，灵敏度高，准确性好。
【关键词】高效液相色谱法；维生素A；维生素E；维生素K1
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Determination content ofcompound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography
XI Ying.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of BengbuMedicalCollege,Bengbu ，Anhui233004，China
【Abstract】 Objective To determine the contents in compound vitamins A、E、K1 injection by high performance liquid chromatography(HPLC).Methods HPLC was used C18column(150 mm×46 mm,5 μm)was selected,the mobile phase was methanol-alcohol(80∶20).Detection was performed by UV with wavelength of 270 nm.Results A linearity of retinyl palmitate was obtained from 125 to 125.5 μg/ml with good correlation(r=0.999 9).The average recovery of retinyl palmitate was 99.38%,and RSD Was 1.36%.A linearity of vitamin E was obtained from 125 to 1251 μg/mlwith good correlation(r=0.999 8).The average recovery of vitamin E was 98.87%,and RSD was 0.95%.A linearity of vitamin K1 was obtained from 16.5 to 166.5 μg/ml with good correlation(r=0.999).The average recovery of vitamin K1 was 98.08%,and RSD was 1.57%.Conclusion The RP-HPLC is sensitive and accurate in determining thecontents in compound vitamin injection.
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【Key words】Highperformance liquid chromatography；Vitamin A；Vitamin E；Vitamin K1
维生素(vitamin)是维持人体正常物质代谢和某些特殊生理功能不可缺少的低分子有机化合物，主要参与各种酶的组成，因其结构和理化性质不同，使其各具特殊的生理功能。复方维生素注射液可作为全营养静脉输液的添加剂,以满足每日的维生素需要[1]。近来有系统测定维生素的报道，但多数是报道纯品维生素的分离分析。本文应用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定复方维生素注射液A、E、K1含量，现作报告。
1 仪器与试剂
仪器：岛津LC-10A高效液相色谱仪系统，包括LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，C-R8A色谱数据处理仪。色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150 mm×46 mm，5 μm),不锈钢柱(Shin-pack CLC-ODS)。试剂：甲醇、酒精均为分析纯。维生素A棕榈酸酯对照品[由巴斯夫(中国)有限公司提供]；维生素E对照品、维生素K1对照品(由中国药品生物制品检定所提供)。复方维生素注射液样品批号：041204，041206，041208
, 百拇医药
(由上海第一生化药业有限公司提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：shin-pack CLC-ODS C18柱(150 mm×46 mm,5 μm)。流动相：甲醇-酒精(80∶20)，检测波长270 nm，流速0.5 ml/min。进样量20 μl。在上述条件下，维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1的保留时间分别约为39.98、23.96、18.41 min。
2.2 对照品溶液的制备 避光条件下精密称取维生素A棕榈酸酯约62.5 mg、维生素E 625 mg、维生素K1 83.3 mg，置100 ml量瓶中，加无水酒精使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀(临用前制备)。
, 百拇医药
2.3 供试品溶液的制备 避光条件下精密量取样品溶液1 ml，再精密加水1 ml，然后精密量取1 ml慢速上sep-pake18柱(预先用20%酒精洗涤)，推尽，精密量取无水酒精5 ml慢速洗脱，推尽，收集无水酒精液4 ml的洗脱液置容器中，备用。
2.4 专属性试验 按上述色谱条件和试验方法，取本品空白辅料1 ml照供试品溶液配制项下的方法制成空白辅料溶液，将上述对照品溶液、供试品溶液及空白辅料溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱。本方法能有效分离复方维生素注射液A、E、K1含量，且空白辅料对本品主药测定无干扰。
2.5 标准曲线的制备 取对照品，维生素A棕榈酸酯约6.25 mg、维生素E约625 mg和维生素K1约83.3 mg分别精密称定，置100 ml量瓶中；加无水酒精溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取该溶液1、3、5、7和10 ml置50 ml量瓶中，加无水酒精稀释至刻度，摇匀，分别量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以维生素A棕榈酸酯、维生素E和维生素K1 3种组分的浓度(C)为横坐标，以3种组分的峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程，并绘制3种组分标准曲线，结果见表1。, 百拇医药(郗 颖)