直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV抗体的对比分析
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【摘要】 目的 合理选择检测试剂，建立一种准确的ELISA检测方法。 方法 直接ELISA法和间接ELISA法对不同血液标本分别进行HIV抗体的检测，并对结果进行比较分析。 结果 间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果，而直接ELISA法未出现假阳性结果。结论 直接ELISA法检测结果假阳性率低，作为新一代试剂，可逐步取代间接ELISA法。
【关键词】 酶联接免疫吸附剂测定法；直接ELISA法；间接ELISA法；HIV；检测
检测人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)抗体的常用实验方法有蛋白印迹法、酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)法、胶体金法等。ELISA法的操作步骤简便，试剂成本较低，检测灵敏度较高，尤其适合于标本的快速批量检测，因而我国血站、卫生防疫部门更常使用ELISA法进行血液筛查和检测[1]。ELISA法有直接检测法和间接法，间接ELISA法会造成较大的假阳性检测结果，浪费原本紧张的临床血液资源，打击了一部分献血者的参与积极性，甚至会出现不良社会影响和纠纷[2]。为了合理选择检测试剂，建立一种准确的ELISA检测方法，本文采用直接ELISA法和间接ELISA法分别进行HIV抗体的检测，并对结果进行比较分析，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 标本来源
随机选取本中心接收的血液标本314例，采用间接ELISA法检测结果HIV阳性8例的血液标本，经过上级确认实验室确认的HIV阳性3例的血液标本。
1.2 仪器
ETI-MAX3000型全自动酶免分析仪。
1.3 试剂
检测所用的质控血清为卫生部临床检验中心提供。间接ELISA法试剂盒分别购自国内公司 (A)与公司 (B)。直接ELISA法为双抗原夹心法，所用国产试剂盒购自国内某公司(C)，进口试剂盒购自日本某公司(D)。所有试剂均在有效期内使用，严格按照说明书规定的操作步骤进行。
1.4 检测方法
将血液样品离心后，通过自动加样器加样，在全自动酶联免疫分析系统中进行两次免疫初筛。对于初筛阳性血液标本采用双孔平行检测法再次检测。采用GeneLab试剂将ELISA法初筛结果阳性的血液标本进行免疫学蛋白印迹法确证实验。
2 结果
间接ELISA法和直接ELISA法检测HIV抗体的阳性结果比较见表1。可见，间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果，而直接ELISA法未出现假阳性结果。
3 讨论
ELISA法是进行HIV感染情况的最常用初筛方法。间接ELISA法采用非特异性的抗人IgG作为酶标二抗，只可检测IgG抗体，对在微孔板上吸附的抗体无筛查功能，因而间接ELISA法特异性较低。影响间接ELISA法特异性的因素较多，但大比例的是由非特异性因素造成的。这是由于HIV抗原和其他逆转录病毒抗原存在交叉反应，而一些人血清中的HIV抗体和HIV感染的淋巴细胞抗原也存在交叉反应，所以会出现一定比例的假阳性结果[3]。直接ELISA法的采用固相抗原的抗-HIV抗原作为酶标，固相抗原和抗-HIV抗原可对血清中的HIV抗体进行双重识别[4]，因此，直接EL ISA法特异性较高，其检测HIV抗体的假阳性结果比间接ELISA法降低。
可用于ELISA法检测的试剂盒较多，国产试剂盒价格较低、灵敏度较高，而进口试剂盒价格较昂贵、特异性强、稳定性高[5]。目前国内ELISA法检测试剂盒没有采用统一的质量标准，因而国产间接法试剂盒的检测结果出现不同例数的阳性结果。在国产和进口直接ELISA法试剂盒的对比中，二者的检测结果无差异，均和确证实验结果一致。因此，使用国产双抗原直接ELISA法试剂盒来进行血液的HIV筛查工作，成本较低，而特异性、灵敏度均符合要求。
参 考 文 献
[1] 殷勤，盛磊. 不同孵育方式对ELISA法抗-HIV(1+2)检测结果的影响 ......
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