【摘要】 目的 在大肠杆菌中克隆、表达金黄色葡萄球菌氨基糖苷类耐药基因：腺苷酰转移酶基因， 为其功能研究奠定基础。方法 按金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶蛋白编码序列设计引物， 以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板， 扩增腺苷酰转移酶基因。将所得片段与pGEX-4t-1(+)载体连接， 转化到感受态大肠杆菌BL21(DE3)， 提取质粒进行双酶切及测序鉴定， IPTG诱导重组蛋白表达， SDS-PAGE及Western-blot对重组蛋白进行鉴定。结果 使用金黄色葡萄球菌基因组为模板， 成功扩增约800 bp目的片段， 重组质粒双酶切见目的片段， 测序显示腺苷酰转移酶基因长783 bp， 启始于ATG， 终止于TAG， 预测的等电点及分子量分别为7.75、28975.44， 目的基因与Genbank金葡腺苷酰转移酶同源性为99%， SDS-PAGE及Western-blot显示在55 kD左右见重组蛋白表达。结论 在大肠杆菌中成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶基因 ......