人乳头瘤病毒阳性阴道分泌物蛋白指纹图谱初步研究(2)
1. 2 仪器与试剂 实时荧光定量PCR仪(7500型)购自美国ABI公司；PBSⅡ-C型蛋白指纹图谱仪(SELDI-TOF-MS)、金芯片(Proteinchip golden array)购自美国Bio-Rad公司；丙酮、 Insulin、Cytochrome C、Myoglobin、芥子酸(SPA)购自美国Sigma公司；离心机Microfuge 18 Centrifuge 购自美国贝克曼库尔特。
1. 3 方法
1. 3. 1 蛋白提纯 将收集好的阴道分泌物标本于4℃ 1500 r/min 低速离心 5 min， 然后取上清液 2 ml 与 8 ml 冷丙酮混合后放置过夜。将过夜标本 10000 r/min 离心 15 min， 弃去上清液。吸取 20 μl ddH2O 加入沉淀中混匀即为蛋白样品。
1. 3. 2 仪器校正 采用蛋白标准品 Insulin(MW 5733.49)， Cytochrome C(MW 12230)， Myoglobin(MW 16 9 50)对 SELDI-TOF-MS进行分子量校准和检测参数设置。
1. 3. 3 蛋白指纹图谱检测 取蛋白样品 5 μl与 5 μl 半饱和SPA混合后 ......
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1. 3 方法
1. 3. 1 蛋白提纯 将收集好的阴道分泌物标本于4℃ 1500 r/min 低速离心 5 min， 然后取上清液 2 ml 与 8 ml 冷丙酮混合后放置过夜。将过夜标本 10000 r/min 离心 15 min， 弃去上清液。吸取 20 μl ddH2O 加入沉淀中混匀即为蛋白样品。
1. 3. 2 仪器校正 采用蛋白标准品 Insulin(MW 5733.49)， Cytochrome C(MW 12230)， Myoglobin(MW 16 9 50)对 SELDI-TOF-MS进行分子量校准和检测参数设置。
1. 3. 3 蛋白指纹图谱检测 取蛋白样品 5 μl与 5 μl 半饱和SPA混合后 ......
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