ABCG2在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究(2)
细胞存活率=(实验组A值/对照组A值)×100%,耐药指数=耐药细胞半抑制浓度(IC50)/亲代细胞IC501.2.3 ABCG2、p-AKT蛋白在A549、A549/GR细胞的表达 用吉非替尼分别处理A549、A549/GR,细胞裂解后,提取总蛋白,应用BCA法行蛋白定量。在120 V下持续电泳至样品到达凝胶底部。半干转膜仪转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,洗膜后,剪下相应条带,分别放入GAPDH、ABCG2、p-AKT多克隆一抗中(1∶1000稀释),4℃冰箱孵育过夜。次日,将PVDF膜从一抗中取出,洗膜缓冲液(TBST)洗脱3次,置于二抗(1∶2000稀释)中,于摇床上摇动,洗脱3次。最后将配好的电化学发光(ECL)液滴加覆盖PVDF膜。使用超灵敏化学发光仪进行曝光,选择合适曝光时间,观察分析曝光的条带情况。
用浓度为100 ng/ml的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及浓度为20 μmol/L的LY294002分别处理A549、A549/GR细胞48 h,用上述同样方法检测蛋白的表达。
1.2.4检测细胞中ABCG2外排 取A549细胞及A549/GR细胞作为对照 ......
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