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编号:13376334
TNIP1基因沉默对系统性红斑狼疮患者B细胞上BCR、CD40基因表达的影响(2)
http://www.100md.com 2019年5月25日 《中国当代医药》 2019年第15期
     1.3.3病毒包装 将293T细胞原先的培养基抽吸掉,然后转为6 ml的无双抗,无胎牛血清的纯DMEM培养基,再放入恒温培养箱中待用。将TNIP1-siRNA(设置为干扰组)、pLKO.1(设置为对照组)及包装质粒psPAX2、pMD2.G以3∶1的比例进行细胞转染。即取两只新的1.5 ml的EP管,分别加入2 μg TNIP1-siRNA、2 μg包装质粒(1500 ng psPAX2和500 ng pMD2.G)和2 μg pLKO.1和2 μg包装质粒,再分别加入200 μl纯DMEM培养基。取12 μl罗氏转染试剂于300 μl的纯培养基(10%血清、100 U/ml雙抗青链霉素)中,常温静置6 min。将转染的试剂稀释液加入DNA稀释液中,于室温静置20 min后,将混匀的物质加入到培养基中,6 h后补加10%胎牛血清(600 μl),1%双抗(60 μl)。分别收集48、72、96 h的细胞上清液,再用0.22 μm的过滤器过滤后放于-20℃备用。

    1.3.4外周血淋巴细胞的分离 向新鲜的血液中加入同等体积的PBS ......
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