1.1.2 主要试剂 质粒中量抽提试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；嘌呤霉素、小鼠抗人β-actin单抗、兔抗人ILK单抗及Western blot试剂盒购自美国Sigma公司；转染试剂梭华-sofast购自sunma公司；Trizol为美国Invittrogen公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 人ILK基因引物合成 采用Primer Premier 5.0软件，根据gene bank提供的ILK、β-actin、PI3K基因的cDNA序列设计特异性引物。序列由上海生工生物工程公司合成。

    1.2.2 细胞转染、稳定转染细胞株的培养 按照梭华-sofast阳离子聚合物转染试剂盒说明书进行操作，6空板中铺80%密度的细胞，将转染试剂分别加入敲低ILK质粒和空载体质粒，形成阳离子聚合物后，加入相应孔板中，分别命名U251-si、U251-N，同时设立对照组U251。转染48 h后，以1∶6稀释传代至新6空板中，细胞贴壁后，用提前配置的含有8 μg/ml的嘌呤霉素RPMI-1640培养液持续筛选3周 ......