寡核苷酸类药物磷的定性定量分析(2)
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3.5 回收率测定
取干燥至恒重的样品(CT102，批号20120626)43.5 mg，用水溶解，置50 mL容量瓶中，加水至刻度。分别取5 mL，7份，分别置于圆底烧瓶中，其中6份分别加入磷酸二氢钾标准溶液(C=0.186 mg/mL)2.0，2.0，2.5，2.5，3.0和3.0 mL，剩余一份不加标液。然后各加水至20 mL，玻璃珠数粒，浓硝酸2 mL，用调温电热套加热浓缩至10 mL，冷却。再加浓硝酸5 mL，用调温电热套加热浓缩至10 mL，冷却。再加5 mL高氯酸，用调温电热套加热，待冒白烟后，于瓶口处放一漏斗，使其回流并回流浓缩直至溶液为3 mL，放置，待冷却，定量转移至100 mL容量瓶中，用水冲洗净烧瓶数次，加水至刻度，即得回收率测定样品溶液。从样品溶液中各取10 mL置于25 mL容量瓶中，加2.5 mL钼酸铵溶液，震荡并放置30 s，再加2.5 mL对苯二酚溶液，最后加2.5 mL 20%的亚硫酸钠溶液，空白为不加对照品母液其余相同的溶液，放置30 min。用紫外可见分光光度计于730 nm处测其吸收值，依标准曲线计算磷的量，测定回收率。回收率结果如表2。
3.6 核磁共振31P-NMR谱P S键
用核磁共振31P-NMR谱，确定本品寡核苷酸类化合物磷酸骨架上化学位移为55 ppm的PS键。
图1 PS键核磁共振31P-NMR谱图
4 结论
用硝酸-高氯酸消解，钼酸铵比色紫外分光光度法测
定寡核苷酸类抗肝癌药物和抗病毒药物中磷的含量，简单易行，操作性强，结果稳定性好，回收率较高，可为其他核酸类药物测定提供借鉴。
本文钼酸铵比色紫外分光光度法[4]测定该药品中磷含量测定磷含量，两批CT102中磷含量为8.345%(20120626)和8.22%(20120817-2)；两批FLU中磷含量为8.89%(20100706)和8.982%(20100512-1)。
用核磁共振31P-NMR谱，确定了本品寡核苷酸类化合物磷酸骨架上化学位移为55 ppm的PS键。见图1。
[参考文献]
[1] 刘德富.卵磷脂中磷的分光光度法测定[J].松辽学刊(自然科学版)，1998，10 (4)：41.
[2] 马金玲，张红军.分光光度法测定大豆磷脂中磷的含量[J].黑龙江医药科学，2000，23(1)：21.
[3] 陈世彬，史亚军，施俊辉，等.黄芩提取物亚微乳中磷含量的测定[J].成都中医药大学学报，2012，35(3)：70.
[4] 中华人民共和国国家标准.GB 11893-89水质总磷的测定钼酸铵分光光度法[S].1989.
(收稿日期：2013-03-25)
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