1.5 Realtime-PCR检测ECT2表达情况

    培养A-1细胞至对数生长期，转染p-CMV-SOX1或SOX1 siRNA，转染24h后Trizol 法提取总RNA，逆转录获得cDNA。Realtime-PCR检测ECT2表达情况，以GAPDH为内参进行结果校正。引物序列参见表1。

    1.6 染色体免疫共沉淀

    培养A-1细胞至对数生长期，转染p-CMV-SOX1，按照ChIP试剂盒抽提DNA，所需抗体分别加入SOX1抗体及IgG抗体为阴性对照，收集DNA。未加抗体组设为Input。从NCBI数据库中查出ECT2基因5’端-1000bp至+100bp序列(转录起始点为0)，设计5对引物(图3A)，用上述5对引物通过Realtime-PCR检测每个样本Ct值，靶序列的Ct值=2(Ct of Ip’ed DNA-Ct of input)。

    1.7 荧光素酶报告法

    根据ChIP实验结果设计引物 ......